活性氧（reactive oxygen species, ROS）熒光探針系列之：
CellROX Oxidative Stress Reagents 氧化應激檢測試劑
背景需求：
氧化應激是由于反應性活性氧物質ROS產生和細胞清除ROS的不平衡導致的，ROS與核酸、蛋白質和脂質反應導致細胞和組織損傷。ROS的過多累積往往引起某些疾病的發生，包括炎癥、動脈粥樣硬化、衰老以及衰老相關的退行性疾病等。為此，ROS產生及其治病機理的研究越來越受到科學家的關注。
基本介紹：
CellROX氧化應激試劑（CellROX Oxidative Stress Reagents）是專門設計用來可靠檢測活細胞內活性氧ROS的一系列熒光探針。這些細胞膜滲透性的試劑當處于還原態時無熒光或極弱熒光，一旦被氧化后發出強熒光。
Thermo Fisher (Invitrogen)提供三種CellROX氧化應激試劑，CellROX Green Reagent是一種DNA染料，一旦氧化后與DNA結合，因此，信號主要定位在細胞核和線粒體。相反，CellROX Orange Reagent和CellROX Deep Red Reagent的熒光信號定位在細胞質。CellROX氧化應激試劑產生的熒光皆可用傳統的熒光顯微鏡、高內涵篩選儀器（HCS）、流式細胞儀、熒光酶標儀或高通量篩選（HTS）。還與各種臺式儀器兼容，比如FLoid?，Tali?，和Attune?儀器。
產品優勢：
CellROX氧化應激試劑（CellROX Oxidative Stress Reagents）具有以下優勢：
◇ 染色流程非常簡單（見Fig 1. CellROX Green Reagent的染色流程圖），試劑直接加入完全培養基或緩沖液內的細胞。
◇ 與傳統的ROS檢測探針相比，光穩定性非常好。另外，某些CellROX氧化應激試劑經后期的甲醛固定和去污劑透化處理后，仍維持良好的熒光信號（見Table 1. ROS檢測方法的比較表）。
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CellROX Deep Red Reagent |
CellROX Orange Reagent |
CellROX Green Reagent |
DCFH-DA |
DHE |
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Readout |
CellROX探針本身是還原態，無熒光，一旦氧化后發亮綠色、橘色或深紅色熒光。CellROX具細胞膜滲透性，能輕松加載進入活細胞。 |
本身無熒光，氧化后發強綠色熒光。具細胞膜滲透性。 |
本身藍色熒光，進入細胞氧化后，與DNA結合生成紅色熒光。 |
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Common filter set |
Cy5 |
RFP |
FITC |
FITC |
Suitable filter |
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Ex/Em (nm) |
640/665 |
545/565 |
485/520 |
504/529 |
518/606 |
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Live cell–compatible |
Yes |
Yes |
Yes |
Yes |
Yes |
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Labeling in complete medium |
Yes |
Yes |
Yes |
No |
Yes |
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Formaldehyde-fixable |
Yes |
No |
Yes |
No |
No |
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Detergent-resistant |
No |
No |
Yes |
No |
No |
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Compatible platforms |
*Imaging *HCS *HTS *Flow cytometry *Attune Acoustic Focusing Cytometer |
*Imaging *HCS *Flow cytometry *Tali image-based cytometer |
*Imaging *HCS *Flow cytometry *Tali image-based cytometer *Floid cell imaging station *Attune Acoustic Focusing Cytometer |
*Imaging *HCS *HTS *Flow cytometry *Floid cell imaging station |
*Imaging *HCS |
◇ 通過對內皮細胞維生素K3誘導的ROS生成的抑制實驗，發現CellROX氧化應激試劑特異性檢測ROS（見Fig 2 基于CellROX氧化應激試劑定量和統計分析氧化應激水平）。
A）CellROX Green Reagent. 在MatTek激光共聚焦專用玻底培養皿內接種培養牛肺動脈內皮細胞（BPAE）。之后用含維生素K3（100μM）或不含維生素K3的培養基37℃處理1h。向某些對照和維生素K3處理孔內加入N-乙酰半胱氨酸（NAC，50μM）。之后細胞用CellROX Green Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，前者加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經PBS清洗后，在Zeiss Axiovert倒置顯微鏡下檢測（40X物鏡）。N-乙酰半胱氨酸處理抑制TBHP誘導生成的ROS，證實CellROX檢測到的熒光信號來自化合物誘導產生的ROS。
B）CellROX Orange Reagent. 在96孔板內接種培養牛肺動脈內皮細胞（BPAE）。之后用含TBHP（200μM）或不含TBHP的培養基37℃處理2h。向某些對照和TBHP處理孔內加入依布硒（依布硒啉）（Ebselen，10μM）。之后細胞用CellROX Orange Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。依布硒啉抑制TBHP誘導產生的ROS，證明CellROX檢測到的熒光信號來自化合物誘導產生的ROS。
C）CellROX Deep Red Reagent. 在96孔板內接種培養牛肺動脈內皮細胞（BPAE）。之后用含維生素K3（100μM）或不含維生素K3的培養基37℃處理1h。在孵育的后30min向某些對照和維生素K3處理孔內加入超氧化物清除劑MnTBAP（100μM）。之后細胞用CellROX Deep Red Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。
◇ CellROX氧化應激試劑能偶與其他細胞活力檢測探針聯合檢測，是一種非常有用的多重熒光方法來測定大量的細胞現象（見Fig 3 人U2-OS細胞的氧化應激檢測）。
Fig 3. 表達Celllight Actin-RFP的人骨肉瘤細胞（U2-OS）用維生素K3(Menadione, 100μM)處理1h。之后用CellROX Green Reagent（5μM）和Nucblue live cell stain（2滴/ml）于37℃染色30min。細胞清洗后置于活細胞成像液內檢測。
CellROX訂購信息：以上所有產品均為Life（Invitrogen）原裝正品，原始包裝為10x50 μg（10支50μg單個包裝構成）。我司對C10444、C10422進行拆開銷售，特惠價為2180元/支，單支50μl，現貨銷售，歡迎訂購。
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貨號 |
產品名稱 |
規格 |
報價（元） |
小包裝供貨 |
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5 x 50 uL |
7156 |
是（50 μl） |
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C10443 |
CellROX Orange Reagent 氧化應激探針（橙色） |
5 x 50 uL |
7214 |
否（50 μl） |
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5 x 50 uL |
7175 |
是（50 μl） |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
