核酸/蛋白提取重要工具酶：

脫氧核糖核酸酶I，核糖核酸酶A，全能核酸酶

（DNase I，RNase A，Benzonase）

搜索關鍵詞：

脫氧核糖核酸酶I（DNase I），Sigma D5025，核糖核酸酶A（RNase A）,全能核酸酶（Benzonase）,Merck 70746-3；CAS：9001-99-4；蛋白酶K（Protease K）；

背景需求：

分子生物學實驗中，要想研究核酸（DNA, RNA）的各種功能、表達和群落分布等相關研究，首先要做的第一步就是核酸制備。核酸制備的第一步就是細胞內含物（細胞核，細胞漿）的釋放，由于DNA和RNA經常會裂解的過程中共同釋放出來，不管采用任何強烈程度的提取液都無法避免兩者的干擾，為此，需要采用特異性的酶來去除干擾，保證任一核酸類型的純度。要提取高質量的DNA，需要用RNase A來消化樣品中殘留的RNA；要提取高質量的RNA，需要用DNase I來消化樣品中殘留的基因組DNA等。

蛋白研究中，尤其是重組蛋白（比如生物制品重組單克隆抗體，重組功能蛋白，甚至是疫苗）的制備中，對蛋白的純度要求很高，而蛋白提取的第一步同樣是對細胞內含物的釋放，此時隨著而來的問題就是要盡量去除核酸的干擾，此時既有DNA又有RNA的干擾，傳統方法選擇DNase+RNase組合的酶消化或超聲方法來破壞RNA，這兩種方法都存在不少的缺點，而全能核酸酶（Benzonase）的出現，讓這一步變得很簡單。一種酶即可輕松去除任何核酸類型的干擾。

我司（懋康MKBio）生物根據科研工作者和工業用戶的需求，生產和供應幾種應用率很高的酶制品，產品品質高，且能有大規格供應，歡迎咨詢。

Part 1. 脫氧核糖核酸酶I (DNase I, CAS：9003-98-9)

常見同義名：

DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A脫氧核糖核酸5′-寡核苷酸水解酶，脫氧核糖核酸酶A

CAS NO.：9003-98-9

來源：牛胰腺Bovine Pancreas

分子量：~31kDa

特異性（目的）：水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質（其切割速率受組蛋白影響）

基本描述：

脫氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNase I），在大多數細胞和組織中都能發現的一種核酸內切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產生5’端為磷酸基團、3’端為羥基的多聚核苷酸（見下圖反應流程圖1），平均消化產物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點；而在Mn2+存在條件下，DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點進行切割。

圖1. 脫氧核酸糖酸酶I(DNase I)作用機理圖

主要應用：

• 制備不含DNA的RNA樣本；

• RT-PCR反應前RNA樣本內基因組DNA等可能存在DNA污染的去除；

• T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄后DNA模板的去除；

• DNase I足跡法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白質相互作用；

• 缺口平移法標記探針用；

• 制備隨機DNA片段文庫；

• TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽性對照；

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【溫馨提示】：見我司懋康生物整理的Deoxyribonuclease I (DNase I)脫氧核糖核酸酶I，來源于牛胰腺產品專題。

Part 2. 蛋白酶K (Proteinase K, CAS：39450-01-6)

常見同義名：

Proteinase K (from Tritirachium album)蛋白酶K（林伯氏白色念球菌）；Endopeptidase K肽鏈內切酶K；

CAS NO.：39450-01-6

來源：基因來源林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber)，酵母重組表達

分子量：~29.3kDa

特異性（目的）：切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品內蛋白質的降解，常用于核酸制品中核酸酶（Nuclease）的去除，能降解天然蛋白和變性蛋白。

基本描述：

蛋白酶K（Proteinase K），一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶，pH 4-12的寬廣范圍內均有活性，SDS、尿素或EDTA存在條件下也很穩定。相對分子量約29.3kDa，能夠切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品內蛋白質的降解。對天然和變性蛋白都表現出廣譜的切割特異性，廣泛用于DNA和RNA的純化實驗。

主要應用：

• 對酵母菌、細菌、組織裂解液或哺乳動物細胞裂解液中污染蛋白的降解來改善核酸的提取質量和產量；

• 對樣本材料內酶比如DNase，RNase的失活來改善高分子量核酸的提取質量和產量；

• 膜結合蛋白定位和定向用的拓撲探針；

• 改善PCR克隆效率；

• 核酸酶保護實驗中失活酶混合物；

• 去除結合到陽離子蛋白如溶菌酶和核酸酶A上的內毒素；

• 對石蠟包埋組織的處理以暴露抗原表位用于抗體標記用；

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Part 3. 核糖核酸酶A (RNase A, CAS：9001-99-4)

常見同義名：

Ribonuclease I核糖核酸酶I；Pancreatic Ribonuclease胰腺核酸酶；Endoribonuclease I內源核糖核酸酶I；Ribonucleate 3′-pyrimidinooligonucleotidohydrolase核糖核酸3′-嘧啶寡核苷酸水解酶；

CAS NO.：9001-99-4

來源：Bovine Pancreas牛胰腺

分子量：~13.7kDa

特異性（目的）：低鹽濃度（0-100mM NaCl），可切割單鏈RNA，雙鏈RNA，以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。高鹽濃度（≥0.3M），RNase A僅特異性切割單鏈RNA。

基本描述：

核糖核酸酶A，英文名Ribonuclease A，縮寫RNase A，CAS NO：9001-99-4，一種核糖核酸內切酶（endoribonuclease），特異性識別嘧啶類核苷酸3’-核糖磷酸基團（作用機理見圖2），如序列pG-pG-pC-pA-pG經切割產生pG-pG-pCp和A-PG，當切割單鏈RNA時活性最高，推薦工作濃度為1-100μg/ml，兼容于各種反應體系。低鹽濃度（0-100mM NaCl），可切割單鏈RNA，雙鏈RNA，以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。高鹽濃度（≥0.3M），RNase A僅特異性切割單鏈RNA。RNase A不會水解DNA，因DNA缺少形成環形中間體必需的2’-OH。

主要應用：

• RNase保護實驗（RNase protection assays）；

• 去除非特異性的結合RNA（bound RNA）；

• RNA序列分析；

• 蛋白樣品中含有的RNA污染降解；

• DNA純化；

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相關產品：

【備注】：核糖核酸酶H (RNase H)：特異性分解RNA-DNA雜交體中的RNA鏈的一種核糖核酸內切酶，不能消化單鏈或雙鏈DNA。

Part 4. 全能核酸酶/廣譜核酸酶 (Benzonase, CAS：9025-65-4)

常見同義名：

Benzonase endonuclease；Benzonase Nuclease；BenzNuclease; Universal Nuclease; Turbonuclease;全能核酸酶；廣譜核酸酶；

CAS NO.：9025-65-4

來源：基因來自粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又稱為靈桿菌）；酵母重組表達；

分子量：~27.9kDa

特異性（目的）：可以切割和降解各種形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線性，環狀，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5個寡核苷酸殘基片段，并且在很多種操作條件下有效。

基本描述：

Benzonase，中文名全能核酸酶，或廣譜核酸酶，一種源于粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又稱為靈桿菌）的非特異性核酸內切酶，由兩個完全一樣的亞基構成，每個亞基大約30kDa，含有245個氨基酸和兩個必需的二硫鍵?？梢郧懈詈徒到飧鞣N形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線性，環狀，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5個寡核苷酸殘基片段，并且在很多種操作條件下有效（反應機制見圖3）。對核酸堿基序列無特異性要求，可在鏈內任意核苷酸間進行切割，廣泛用于去除生物制品中的核酸。

主要應用：

• 科研研究中，作為培養細胞上清和細胞裂解液去粘度的首選酶制劑，去除核酸干擾提高后續蛋白純化或功能研究；

• 用在生化分析樣品制備——ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程，使用本品benonase處理含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，以及提高回收率。

• 疫苗工業、蛋白和多糖類制藥工業，去除宿主核酸殘留，使得疫苗和蛋白類核酸污染顯著降低至皮克級別，提供生物功效。

• 防止細胞凝聚（Cell clumping），特別是融化凍存的細胞樣品時；

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【溫馨提示】具體信息見懋康網站全能核酸酶精品介紹（含常見問題和使用方法）。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本公司提供產品僅能用作科研用途，不可他用。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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