單線態氧熒光探針 Singlet Oxygen Sensor Green（SOSG）

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產品關鍵詞：

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG；單線態氧（Singlet Oxygen,1O2）；單線態氧熒光探針；S36002；Thermo Fisher; ROS（Reactive oxygen species）活性氧物質；

活性氧引起的許多生理損傷都可能歸因于單線態氧（1O2），包括與脫氧鳥苷選擇性反應形成8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）的核酸修飾。單線態氧的壽命足夠長（水中有4.4μs）使其能夠充分擴散進入細胞和組織。實驗室中通常用三種之一的方法來生成單線態氧：1）使用感光染料對二氧（3O2）進行光化學反應來制備；2）通過對一種過氧化物或二氧環丁烷進行加熱分解制備；3）氧氣流內通過微波放電來制備；單線態氧通過在1270nm處具弱化學發光的典型特征直接被檢測。

Thermo fisher（molecular probe）公司開發的Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG是目前商業化可得且應用最廣泛的單線態氧熒光探針，從材料學到藥物學領域，比如光動力學療法。

【特異性強】

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG高度選擇性結合單線態氧（1O2）。不像其他的熒光和化學發光的單線態氧檢測試劑，SOSG與其他活性氧物質（ROS），包括羥基自由基（·OH）、超氧陰離子（·O2–）和一氧化氮（NO）無可見反應【見圖1】。

圖1、Singlet Oxygen Sensor Green (SOSG)的熒光反應和對單線態氧（1O2）的特異性。A）用熒光光度計（Ex/Em= 488/525nm）測定溶液內的熒光，溶液內含SOSG（1 μM ）和亞甲基藍（10 μM）溶于100mM pH 7.5 Tris Buffer; 單線態氧清除劑疊氮鈉（NaN3，1 mM）；或50% D2O（重水，能夠延長1O2的壽命）。每20s完成一次熒光測定，每次測定間隔30s（如灰條標示）。在這30s的間隔中，樣本暴露于激光輻射（630–680 nm，<5 mW），導致亞甲基藍光敏生成1O2。B）用熒光光度計（Ex/Em=488/525nm）測定溶液內的熒光，溶液為50mM pH 7 Tris buffer，1mM 黃嘌呤，SOSG（1 μM ），或含SOSG（1 μM ），或含二氫羅丹明123。約20s之后，加入50 mU/mL黃嘌呤氧化酶（XO）。XO催化黃嘌呤的氧化，產生尿酸和超氧化物。超氧化物瞬間被H2O2降解。

【熒光特征】

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG與單線態氧（1O2）反應前，探針最初發弱藍色熒光，激發峰在372nm和393nm，發射峰在395nm和416nm。當含單線態氧（1O2），探針發射綠色熒光，光譜特征類似于熒光素（最大激發/發射波長約504/525nm）。

【線性化關系】

研究發現Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG的熒光產物在某些溶液中隨著時間被降解，且在不含單線態氧的堿性pH溶液中，Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG會發熒光。不過，當進行適當的操作，綠色熒光信號的強度與單線態氧（1O2）含量相關，且不會受其他ROS的明顯干擾。

【應用】

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG證實能用來檢測溶液和植物組織中的單線態氧（1O2）。

【使用方法】

1.       SOSG儲存液制備：收到貨按照≤-20℃避光干燥保存。用甲醇來制備儲存液，每100μg粉末加入33μl甲醇制備~5mM儲存液。正式實驗前制備工作液，不能用完的工作液需丟棄，不可保存后再用。

2.       溶液檢測：SOSG不具細胞膜滲透性，設計用來檢測溶液環境內的單線態氧。最佳的稀釋緩沖液和工作濃度需根據經驗來調整。建議起始工作濃度為1-10μM。

【爭議點】

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG不具有細胞膜滲透性，能用于細胞單線態氧（1O2）檢測？

專利持有方thermo（molecular probe）官方說明此探針不具有細胞膜滲透性，適用于溶液體系單線態氧（1O2）檢測。然而，Gollmer A et al.報道SOSG能插入活哺乳動物細胞（文獻來源：Gollmer A et al. Singlet Oxygen Sensor Green®: photochemical behavior in solution and in a mammalian cell. Photochem Photobiol. 2011 May-Jun;87(3):671-9.）。

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【溫馨提示】：見我司懋康生物整理的活性氧檢測探針專題（Probes for reactive oxygen species）。

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注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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